第一篇：大豆分离蛋白的主要工艺流程

大豆分离蛋白的主要技术性能指标 水份：≤6% 干基粗蛋白：≥90% 水溶氮指数：≥60% TPC：≤10000个 大肠杆菌：0个 色泽：浅黄/乳白

气滋味：具有分离蛋白特有的气滋味 PH值：6.8～7.2 密度：过200目筛95%，过270目筛 90% 产品的功能特性将根据不同应用领域来确认

乳化型：通过1（蛋白）：4（水）：4（脂肪）的测试，肠体光亮、有弹性，无油、水渗出。

高凝胶型：通过1（蛋白）：5（水）：2（脂肪）的测试，肠体光洁度好，有弹性，无油、水渗出。

高分散（注射）型：1:10(蛋白:水)试验：稍搅拌溶解，静置三分钟无分层，0.5mm注射针头完全通过。大豆分离蛋白工艺流程

低温豆粕——萃取——分离——酸沉——分离——水洗——分离——中和——杀菌——闪蒸——干燥——超细粉碎——混合造粒——喷涂——筛选——金属检测——包装 工艺简要描述：

萃取：将大豆低温豆粕置入萃取罐中按1：9的比例加入9倍的水，水温控制为40C0，加入碱使溶液在PH为9的条件下低温豆粕豆粕中的蛋白溶解于水中。

分离：将低温豆粕溶液送入高速分离机，将混合溶液中的粗纤维（豆渣）与含有蛋白的水（混合豆乳）分离开。豆渣排到室外准备作饲料销售。混合豆乳回收置入酸沉罐中。

酸沉：利用大豆蛋白等电点为4.2的原理，加入酸调整酸沉罐中混合豆乳的PH到4.2左右。使蛋白在这个条件下产生沉淀。

分离：将酸沉后的混合豆乳送入分离机进行分离，使沉淀的蛋白颗粒与水分离。水（豆清水）排入废水处理场治理后达标排放。回收蛋白液（凝乳）到暂存罐。

水洗：按1（凝乳）：4的比例加水入暂存罐中搅拌。使凝乳中的盐份和灰份溶解于水中。

分离：将暂存罐中的凝乳液送入离心机进行分离。水排入废水处理场治理达标排放，凝乳回收入中和罐。

中和：加入碱入中和罐，使凝乳的PH调整到7。杀菌：将中和后的凝乳利用140C0的高温进行瞬时杀菌 干燥：将杀菌后的溶解送入干燥塔，在干燥温度为180C0的条件下将溶解干燥。

筛选：对干燥的大豆分离蛋白进行初步筛选。使98%通过100目标准筛。

超微粉碎：用特殊超微粉碎机对产品进行粉碎，使90%通过200目标准筛造粒：产品随后进行造粒设备进行造粒，使产品粒度均匀。

筛选：对产品进行进一步筛选。

喷涂：在产品表面喷涂表面活性剂，提高产品乳化稳定效果。金属检测：对产品进行金属检测。

包装：检测后的产品进行自动包装系统，按规定的重量进行包装。

第二篇：蛋白分离技巧

浅述蛋白质分离纯化的新技术

摘 要： 本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术，综和近年来国内外的一些研究结果，结合实际应用的例子，分析了各种分离纯化方法的优点，同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。生物技术的发展非常迅速，基因工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术，已经能设计、制造、生产人们急需的多种蛋白质。和其它生物产品的生产过程一样蛋白质的生产过程一般也分为上、中、下游过程。上、中游过程是运用生物技术生产目标产物，下游过程是指对含有目标产物的物料进行处理、分离、纯化、加工目标产物。本文主要综和近年来国内外的研究结果，介绍了蛋白质的最新分离纯化技术。

2.蛋白质的分离纯化方法： 2.1 浊点萃取法(CPE)： 2.1.1 概念及原理：

浊点萃取法(cloud point extraction，CPE)〔1〕是近年来出现的一种新兴的液—液萃取技术，它不使用挥发性有机溶剂，不影响环境。它以中性表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础，改变实验参数引发相分离，将疏水性物质与亲水性物质分离。目前该法已成功地应用于金属螯合物、生物大分子的分离与纯化及环境样品的前处理中[2-5]。CPE 法除了利用增溶作用外，还利用了表面活性剂另一个重要性质——浊点现象。溶液静置一段时间(或离心)后会形成两个透明的液相：一为表面活性剂相(约占总体积的5％)；另一为水相(胶束浓度等于CMC)。外界条件(如温度)向相反方向变化，两相便消失，再次成为均一溶液。溶解在溶液中的疏水性物质如膜蛋白，与表面活性剂的疏水基团结合，被萃取进表面活性剂相，亲水性物质留在水相，这种利用浊点现象使样品中疏水性物质与亲水性物质分离的萃取方法就是浊点萃取。图1显示了由温度变化引发的这种相分离现象。温度的改变，引起水化层的破坏，增强了表面活性剂的疏水性。2.1.2 蛋白质分离纯化中的应用：

CPE 法可用于分离膜蛋白、酶、动物、植物和细菌的受体，还可以替代一些分离方法如硫酸铵分级法作为纯化蛋白的第一步，与色谱方法联用。另外，CPE 法分离纯化蛋白质已经可以实现大规模操作。Minuth等人成功地进行了胆固醇氧化酶浊点萃取的中试研究。虽然使用离心分离器可以使CPE大规模连续进行，但商品离心分离器用于CPE 的效率和容量仍需进一步研究。而且，他们发现相分离操作受细胞培养时产生的表面活性物质影响较大，体系两相间密度差较小，表面张力较小，含产物的表面活性剂相的流变学行为较复杂，操作较难。表1列出了CPE法近几年来在蛋白质分离纯化中的应用。(1)CPE法用于分离纯化膜蛋白膜蛋白(内嵌膜蛋白、外围膜蛋白)硫水性强、难溶于水，抽提内嵌膜蛋白时，既要削弱它与膜脂的硫水性结合，又耍使它保持硫水基在外的天然状态，较难分离纯化。由于表面活性刑具有两亲性，它一直作为腹蛋白理想的增溶剂。增溶时，膜蛋白琉水部分嵌入胶束的硫水核中而与膜脱离，又保持了膜蛋白表面的废水结构。相分离后，膜蛋白与表面活性剂共同析出，与亲水性蛋白质分离。所以，CPE 法在分离纯化膜蛋白方面极有优势。

(2)与其它分析技术的联用

CPE 可以作为高效液相色谱(HPLC)、流动注射分析(FIA)、毛细管电泳(CE)等仪器分析的样品前处理方法，提高检出灵敏度。表面活性别可以防止样品吸附在玻璃容器上，易于与FIA中的载液及HPLC中的有机流动相或胶束流动相混合，可以直接进样。但是在很多应用中需要除去表面活性剂后再与仪器联用。将萃取物与表面活性剂分离的方法很多。对于CMC＞1mM 的表面活性剂如两性离子表面活性剂可用透析法，但操作时间较长(24h左右)。对于CMC 较小的表面活性剂可通过色谱柱分离除去，如凝胶柱、毛纫管柱等，分离出的表面活性剂可以再利用，也可以作焚烧处理。但CPE作为HPLC 的样品前处理方法有两个缺点：第一，常用的表面活性剂在UV区域有很强的背景吸收。第二，操作时间较长，从色谱柱上需用几个小时洗脱表面活性剂。表面活性剂的洗脱可能会干扰分析物的测定[3]。

2.2 置换色谱法：

2.2.1 概念及分离机理：置换色谱(displacement chromatography)〔6〕作为一种非线性色谱技术，是指样品输入色谱柱后，用一种与固定相作用力极强的置换剂(displacer)通人色谱柱，去替代结合在固定相表面的溶质分子。样品在置换剂的推动下沿色谱柱前进，使样品中各组分按作用力强弱的次序，形成一系列前后相邻的谱带，并在置换剂的推动下流出色谱柱[7]。置换色谱的分离行为与样品组分和置换剂在实验条件下的吸附等湿线有直接的联系。置换色谱要求样品组分及置换剂的吸附等湿线应为Langmuir 型，而且置换剂相对于被分离的各组分应有最强的吸附能力，其吸附等温线位于所有组分的吸附等温线的上方[7]，见图1(A)。根据物料平衡方程，置换剂在柱中的移动速度uD有下列关系：

式中uD 为流动相的线速，ф为相比，qD 和cD 分别为置换剂在固定相和流动相中的浓度，qD／cD 是直线OD的斜率，称之为操作线(operating line)。当操作线的斜率小于被分离组分等温线的起始斜率，样品才能进行置换展开，最终形成如图l(中的置换序列，这是在理想的情况下(假定无轴向扩散及二次化学平衡)获得的置换色谱图。每一组分形成矩形的平台(Plateau)洗脱峰，相邻各组分的平台洗脱峰组成了一个台阶

状的色谱图。此时，样品中不同的组分以置换剂的速度前进，即达到等速状态(isobathic conditions)：

uD＝u2； u3＝u4式中u2、u3、u4 指被置换的三组分的速度

2.2.2 影响置换色谱分离的因素：

（1）置换剂

置换剂的选择是置换色谱能否成功地分离和纯化目标产物的关键因素之一〔7,8〕。对于蛋白质生物大分子的置换色谱来说，多离子型的置换剂与离子交换续料相结合是目前常用的分离方式。传统观点认为分子量相对大的聚电解质是较合适的置换剂，因为它们对固定相的结合比分离物更强，如羧甲基葡聚糖(CMD)、硫酸葡聚糖、羧甲基淀粉(CMS)〔9〕、硫酸鱼精蛋、肝素、多硫酸戊聚糖(PPS)等。近期的研究表明，低分子量的化合物作为置换剂则更有优势，因为即使置换剂与蛋白质产物的峰有叠加，在后处理过程中，低分子量置换剂则较容易从目标产物中分离；同时，合成低分子量置换剂成本较低，色谱柱再生过程也比分子量大的置换剂快。

（2）固定相

理想的固定相应具备以下条件：样品及置换剂在固定相上应有较强的吸附作用，且吸附是可逆的；样品及置换剂在固定相上的吸附等温线应为Langmuir 型；样品各组分在固定相上的吸附能力应有较大差别，以保证置换色谱带的交叠部分尽可能小而获得良好的产率；有较好的化学稳定性，可适用于不同pH 值的缓冲液和有机溶剂；有较大的比表面及吸附容量；有较好的机械强度，而且容易再生。置换色谱中的环境不同，置换效果也不一样，即使是选用同样的硅胶，由于来源和制备方法上的差异也会影响置换效率。反相

色谱中使用的烷基硅胶柱常被应用于置换色谱。同其它硅胶固定相相比，烷基硅胶柱由于柱容量低及非选择性吸附等缺点，很少被用于洗脱色谱，但它却可以用于置换色诺，并成功地分离了对映异构体。

1、问题：电渗纯化蛋白质，结果几乎没得到蛋白，请问哪位有高见 今夜纯化蛋白，本以为唾手可得，结果却大失所望....我用SDS-PAGE分离，KCL显带，割胶，而后电渗分离，测OD 值极低，请问哪位有这方面的经验或其它方法，望赐教。解决：多挖点胶，收集起来，放在1.5 离心管里，用PBS捣烂，4度 过夜。然后离心，收集上清即可。最后，把上清冻成干粉。

3、问题：蛋白质纯化，装柱，过柱应注意事项有哪些？（dahuaidang）

现在要进行蛋白质纯化，有关装柱和过柱的注意事项有哪些呀？还有，需要测序的蛋白质样品，大概需要多少，样品要求有哪些。柱子sephadex-200,和DEAE-纤维互素。

第一，手工装柱一般只适宜于大量蛋白质的提取。分子筛柱一般在盐析以后用效率才高，因为它的分媛实汀Ｒ话阄叶荚蕹捎茫龋校蹋弥颍疲校蹋弥?Gelfitration column).如果手工装柱，长度应是内径的６０－８０倍，一般柱长应在1.2-2米，对于软胶，走一次柱须１２小时以上，对硬胶，也需５－６小时。

第二，仪器检测器灵敏度调整：最重要的是确定仪器工作正常，信号相应正常。可用在检测器出口通气泡和检测器入口注射有色样品的方法确认仪器正常和估计灵敏度。

第三，均匀, 无气泡，平衡充分，分子筛要注意长度与直径比。测序的蛋白量' 我用的方法的量是SDS-PAGE 第四，如果是测序的话,跑SDS-PAGE,把染出的蛋白质带,挖下来.,直接拿去做质谱,只要你有钱国家生物医学分析中心。还有就是要保证挖的是一个蛋白质带,不能含杂蛋白质的,不然,把杂蛋白质测了怎么办。

第五，测序跟质谱不是一回事儿的。做质谱可以做分子量和质谱图，但是未必是序列。序列是要单测的。北大有位老师可以做：180块钱一个氨基酸。做质谱多得是：测分子量大约是450块钱了，测图谱的要一千多块。

4、问题：跑SDS-PAGE 有好多带，而过柱时却没有峰，原因是什么？

1、会不会是洗脱太快。

2、查查有没有断层。

3、SDS-PAGE 分离能力强, 而在柱子FRACTION 中几个低峰依次串在一起就不明显了。

4、上柱前样品要浓缩，保证样浓度不能太低。如没浓缩，检测仪的量程又没选好，可能看不出来。

5、Sephadex 是Amersham 公司经典的层析填料，有很高的选择性，不同颗粒大小的填料有不同的分离范围，主要用于凝胶层析（亦称分子筛）。粗颗粒流速较快，细颗粒流速较慢，但分辨率较高。Sephadex 200的分离范围（以球蛋白计）是5－60kDa。这种填料的另一个优点是较便宜。（也够贵的）现已被新一代Bioprocess填料代替。DEAE--纤维素是用于离子交换。这是一种弱阴离子填料。

1、如果是离子交换，上样浓度太大反而不好，这样子动态载量会减小；

2、如果是凝胶层析，上样浓度要尽量大些，道理和电泳一样，样品在跑的过程中不可避免地会被稀释，变得“broad”，杂质和目标蛋白的洗脱峰就有更多的部分重叠，影响纯度。

3、关于凝胶层析的上样量，通常是柱体积的2－5％，太多会影响分离效果。你的上样量显然太大了。在现有条件下，可以通过连续批次上样，即不等前次样品跑出柱子，就第二次上样，通常可以做到一个柱体积上两次样，这样子可以节省时间和试剂。但要具体摸索。

4、至于量程的设定，我建议先用缓冲液回零，再用注射器或泵将样品注入检测器，调至满刻度，应该差不多了。

5、edta 是常用的生物缓冲液的成分之一，它在某些情况下会影响层析，具体情况具体分析。

6、什么叫连续批次上样？具体我应该怎么fumble呀，我还从没听说过这个词呢。还望指教。

一般情况下，上柱的样品跑出柱子后，根据紫外或电导或其他检测器的情况分部收集完成后，才开始第二次上样，需要用至少一个柱体积的缓冲液。这种情况下，绝大部分缓冲液是用于将样品“冲”出柱子，尤其是后半部分的缓冲液。有些浪费。这部分缓冲液的完全可以再上一次样品，适当地调节两次上样的间隔，可以做到两次样品完全分开而不会重叠，从而一个柱体积的洗脱中可以两次上样，节省试剂，缩短时间，即所谓“连续批次”。这是相对通常情况下而言的。

7、例子：样品是用10mMTris-Cl,pH7.4(含10mMEDTA),而流洗缓冲是30mMTris-Cl,pH7.9,我自己认为这样应该不会有太大影响吧，希望有知情者告知。好让我下次改正。

分析：根据你的描述，看来你是在用Sephadex 26/100做凝胶层析。

1、凝胶层析主要用途有两个，一个是在其分辨率范围内根据分子大小进行分离，常用于蛋白质纯化的最后一步，即精细纯化（polishing），由于样品体积明显影响分离速度和分辨率，故很少用于粗提纯。另一个用途是脱盐/缓冲液置换，即将蛋白或其他大分子量的组分与无机盐等小分子组分分开。常用于不同层析步骤之间的缓冲液置换，使得样品与待使用的缓冲液成分尽量一致。目前Amersham公司的填料中Sephadex G25较常用于这方面。

2、如果你的凝胶柱子用于蛋白质的分离纯化，如我前所提，分辨率至关重要。装柱的效果直接影响分离效果。装得不好的柱子是对填料的浪费，尤其是用好的凝胶。不知道你是否测过这个柱子的柱效？合格的Sephadex G100柱子的每米理论塔板数应在3000－6000之间。如果低于3000，最好重装。

3、平衡也很重要。柱子装完后，要用和上样缓冲液尽量相同的缓冲液平衡，流速也与上样尽量一致，平衡至少5 个柱体积，让填料“喝饱”，即流出的液体和进的液体成分尽量一致，有时紫外检测器的走线平稳并不一定意味着平衡完成即是如此。连续上样过程中，也要适当进行平衡，比如3－5 次上样后平衡2个柱体积，对柱子的分离效果和寿命都有好处。

8、问题：823a型紫外检测仪——3057型便携式记录仪。我不明白这种组装是啥道理？是通过什么信号使得记录仪能够记录到，由检测器检测出的信息。所以我在操作时，不知道怎么调节。那些按钮之间的关系？

1.短接记录仪，记录笔应回到机械零位，否则调之；

2.接通检测器，检测器中充满1mg/ml 的蛋白质溶液（如Albumin），调节检测器的信号输出（通常是用电压标识 mv），使记录笔接近100％满刻度；

3.检测器中充满缓冲液，看记录笔的位置，最好接近～10％刻度的地方，这样防止出现吸光度值低于缓冲液无法记录的情况；如果笔位太高，应增大检测器信号输出，重新按步骤2 调节；反之降低信号输出；有的记录仪也可调节输入信号的范围，这样子就更方便了。满刻度的调节要视具体应用，不一定是1mg/ml 的蛋白浓度。

9、about dimension of column:（davidzrock）

“The choice of inner diameter may be based on the desired sample load or on considerations of the extra dispersion

effects from the wall region,which extends 20 particle diameters away from the wall....The length of the column is primarily chosen according to the resolution that is required.”

“The dimensions may be chosen according to the application at hand, but most laboratory columns have a 4-to 16-mm inner diameter(i.d.)and a length of 25 to 70 cm.”

-----From „Protein Purification principles,High Resolution Methods,and Applications‟ 2ed edited by J.C.Janson and L.Ryden

“The resolution of two separated zones in gel filtration increases as the sequare root of column length.Long columns should,therefore,be used to obtain the best resolution in analytical fractionation.Bed heights of greater than 1m are seldom required.If a very long bed is judged to be necessary ,the effective bed height can often be increased simply by recycling or by using columns coupled in series.”

从amersham商品化提供的预装柱能看到，没有超过1m的。很长的柱子装填难度极大。装得好的柱子一根可以当两根用。

关于手工装柱，取决于装柱操作者的经验，完全可以比预装柱的效果好，而且可以根据试验的具体情况改变柱子参数。但预装柱的优点是方便、省事，很适合对柱子和填料进行“scaning”。另外工业化的层析要求是重复性，“对人是不信任的”，而不要求最好的效果，只要满足要求即可。这时就要有装柱设备（packingstation）了。现应用于工业生产的凝胶层析柱直径已超过1m。

10、在室温下的柱子，怎么保证其胶不发霉

1.柱子装填和使用过程中要注意减少微生物的污染，如对缓冲液和样品等进行澄清、除菌过滤。低温并不能保证无菌生长。

2.柱子在使用过程中，要定期进行在位清洗/消毒（SIP/CIP，sanitization/clean in place）。如1M NaOH 处理1hr，可有效地减少微生物污染。具体使用哪种消毒剂以及消毒方法，请参阅凝胶及空柱使用说明书，避免损害凝胶柱。如你没有，我可帮你查。

3.柱子长期不用时，为防止微生物生长，建议在位保存。如用10mM NaOH或20％乙醇将柱内的液体全部置换出来，存放在建议温度下（不一定是低温）。使用前再进行冲洗和平衡。也可将凝胶取出，保存于上述溶液中。

4.如有微生物生长，应进行灭菌处理，如1M NaOH 或取出凝胶进行高温灭菌，具体方法亦需事先参阅说明书。

From Amersham Antimicrobial agents for chromatography

Aqueous buffer solutions will often support growth of micro-organisms commonly found in laboratories.Since it is difficult to clean columns that have become heavily contaminated with microorganisms, precautions should be taken to avoid growth in the column or in buffer vessels.Always use fresh buffer solutions and cover the buffer vessels to keep out dust, spores and other particles.If a column will not be used for more than a couple of days, it should be equilibrated with the bacteriostatic agent described in the manual supplied with the separation medium or prepacked column.We recommend ethanol or sodium hydroxide for general use.These agents are effective, inexpensive and do not cause disposal problems.Ethanol 20% Many chromatography media from Amersham Biosciences are supplied as a suspension containing 20% ethanol.Ethanol, 20%, can also be used as an alternative to NaOH for storing chromatography media under bacteriostatic

conditions.It should not be used for columns packed with Sephadex G-types and other media based on Sephadex since the bed will shrink and spoil the packing.Sodium hydroxide Sodium hydroxide, 0.01 M, is an effective bacteriostatic agent.At higher concentrations(0.5-1.0 M)it is an

effective sanitizing agent for contaminated columns.For the most frequent contaminants in chromatographic systems, such as gram-negative bacteria, a good bactericidal effect is reached even at concentrations as low as 0.01 M NaOH.Treatment with sodium hydroxide inactivates endotoxins(LPS)and will, in many cases, solubilize substances precipitated on the column.Its low toxicity is an advantage that reduces the risk of sample contamination.Sodium hydroxide is not recommended for use with Sepharose or for storage of Sephacryl HR.11、层析关于装柱和使用，主要有几点要注意的：（davidzrock）

1、装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不同；

2、填料要加水搅拌成均匀悬液，悬液浓度依填料而不同，一般70－85％，迅速倒入空柱内，或吸或压，流速和具体步骤看说明书。

3、这一点非常重要：装柱包括以后使用中绝对不允许柱内进入气泡（bubble free），柱头事先也要排除气泡。

4、选择合适的泵，首先是流速满足要求，脉冲尽量小。首选柱塞泵。

5、所有柱子尽量做到填料均匀，尤其是用于凝胶层析的柱子。装柱完成后，可用柱效测定的方法检查装填效果。一个装填合格的柱子的理论塔板高度应是填料平均粒径的2－4 倍，在此范围内越小越好。

6、准备上柱的液体应进行过滤，至少是0.45micrometre。

7、至于测序，我想大概不到1mg 应该足够了。

8、关于纯化，首先要考虑的是你的目标：纯度、数量、速度、收率等等，再根据样品的具体情况，尤其是目标蛋白的性质，确定纯化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。第一步先从大量或复杂样品中将目标蛋白“抓出”，与主要杂质分离；再用高选择性的层析去除绝大部分杂质；最后精细纯化，提供纯度至设定目标。到实际工作中，不要死靠三步，也许一步也许四步或更多，具体情况具体分析。所谓“三步”只是一种思路而已。

第三篇：牛奶中酪蛋白和乳糖的分离、鉴定

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离、鉴定(杜青 胡弘毅)

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离、鉴定

杜青 胡弘毅

（化学与分子科学学院；湖北 武汉 430072）

摘要：本文介绍了从牛奶中分离酪蛋白和乳糖的方法，和鉴定酪蛋白的方法。关键词：酪蛋白、乳糖、等电点、分离

1.引言

牛奶是营养最完备的食品之一，这一点已为许多人认识并接受。尤其是在婴儿及青少年时期，每天一定量的牛奶能促进身体健康成长。牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质，这些都是人体发育所必不可少的物质。

牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白。酪蛋白是含磷蛋白质的复杂混合物，在牛奶中以其钙盐形式存在，即酪蛋白钙。利用蛋白质在等电点时溶解度最小的特性，把牛奶的ＰＨ值调到酪蛋白的等电点(ＰＨ =4.8)来沉淀分离酪蛋白。酷蛋白不溶于乙醇和乙醚，所以可用乙醇和乙醚将其中的脂肪洗涤除去。

牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖。它是唯一由哺乳动物乳糖合成的糖，它是在乳腺中被合成的。乳糖是成长中的婴儿建立其发育中的脑子和神经组织所需的物质。乳糖也是不溶于乙醇的，所以，当

2.材料与方法

2.1 实验仪器

恒温水浴锅、抽气抽滤瓶、布氏漏斗、蒸发皿、烧杯600ml、100ml各一个、表面皿、天平、玻璃棒。

2.2 主要试剂

10%醋酸溶液、95%乙醇、乙醚、伊利牌纯牛奶、精密PH试纸（PH=3~5）、碳酸钙、滤纸、1%CuSO4溶液、10%NaOH溶液、茚三酮溶液。

2.3 实验过程

2.3.1 酪蛋白的分离

取三份20ml新鲜牛奶于100ml烧杯中，在恒温水浴中加热至45℃，边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液，通过PH试纸测量至牛奶PH分别为4.8、4.6和3.8。放置冷却、澄清后，抽滤。注意先将上层清液滤出，再将沉淀倾入漏斗中。（滤完后，在滤液中加入少量粉状碳酸钙留作乳糖的分离。）再依次用95%乙醇、乙醇乙醚等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白。用乙醚洗涤时，注意用玻璃棒捣碎成团的固体，并反复翻洗，保证脂肪被洗净。将洗净的酪蛋白移至表面皿上，自然晾干后称重。

2.3.2 酪蛋白的鉴定（在酪蛋白分离后立即完成效果最好）

取少量酪蛋白颗粒于试管中，加入少量水溶解。

取10ml酪蛋白溶液，加入茚三酮溶液5滴，振荡，放入沸水浴中加热2分钟，溶液呈淡紫色。（茚三酮反应）

取10ml酪蛋白溶液，加入10% NaOH溶液2ml后，滴入1%CuSO4溶液1ml。振荡试管，溶液呈蓝紫色。（缩二脲反应）

取10ml酪蛋白溶液，加入浓硝酸2ml后加热，有黄色沉淀生成。再加入10%NaOH溶液2ml，沉淀为橘黄色。（蛋黄颜色反应）

2.3.3 乳糖的分离

将2.3.1中滤液用倾滗法倒至蒸发皿中，用蒸汽浴浓缩至5ml后，将热的混合物用布氏漏斗抽滤，除去沉淀的蛋白质和残余碳酸钙。加热滤液，在热的溶液中加入95%乙醇18

ｍl，并继续加热，待其混合均匀后，趁热过滤，滤液应澄清。把滤液移至锥形瓶中，加塞，放置 1-2天，让乳糖充分结晶。抽滤，分离出乳糖晶体，并用冷的95%的乙醇水溶液洗涤产物，待其干燥后称重。

3．结果与讨论

3.1不同PH值的酪蛋白的实验现象

PH值调到3.8的牛奶,酪蛋白迅速沉淀下来，抽滤的速度也很快，鉴定酪蛋白的几个性质试验现象都十分明显，而且滤液十分澄清，但滤液中只析出微量絮状乳糖。可能是酸的浓度太大，乳糖被大量水解。

PH值调到4.8的牛奶，酪蛋白的沉淀速度很慢，抽滤的速度也很慢，而且抽不干，滤液是浑浊的。

PH值调到4.6的牛奶，酪蛋白沉淀速度和抽滤速度处于上面两种情况的中间，得到3.1g 酪蛋白，性质试验现象明显。滤液略显乳白色，得0.23g乳糖，乳糖呈片状晶体。

3.2奶中脂肪的影响

脂肪也是牛奶的主要成分之一，约占牛奶的3.9%,在分离酪蛋白时，脂肪回夹杂在酪蛋白中一起沉淀出来。因此，在用乙醚洗涤酪蛋白时，应把任何形状的酪蛋白捣碎，并用玻璃棒搅拌约10min，尽可能出去脂肪。否则，酪蛋白长时间放置后会焦化变黄。

3.3碳酸钙的作用

本实验中所使用的碳酸钙，主要是用以中和过剩的乙酸，避免在后面的实验中乳糖在酸性条件下水解，从而影响收得率。

乙醇混入水溶液中时,乳糖会结晶出来 ,从而达到

…¿报名分离的目的。

第四篇：胶原蛋白生产工艺流程是怎样的

胶原蛋白生产工艺流程是怎样的？胶原蛋白是如何制造出来的呢？

胶原蛋白的提取技术主要有：水解胶原蛋白法、酶解法等，现在流行的是酶解法，其工艺过程如下（以生产鱼鳞为例）：

酶解法生产鱼鳞胶原蛋白必需生产环节和工序如下：

生产过程包括：清洗、酶解、过滤、灌装、浓缩、喷雾干燥等几道重要的生产环节，分述各个工序所用的设备的情况。

1、清洗： 这个工序中所用原料如果从原料供应商处直接购买脱灰鱼鳞的话，可不考虑建设，但是如果购买新鲜的湿鱼鳞自行脱灰脱脂处理的话，需有建设地面清洗槽。清洗槽应设计有一个即可，用来酸、碱脱脂脱灰处理。此工序无特殊设备，只做好土建即可。清洗过程中所用的水应为去离子水，需配套双级反渗透纯化水（公用）。

2、酶解：脱脂脱灰处理后的鱼鳞投入酶解反应罐中，进行保温酶解。所用设备和配套设施有双层保温耐压酶解罐、操作平台、燃油蒸汽锅炉。（注：与物料直接接触的生产设备材质均为304以上不锈钢，物料运送过程中使用卫生软管和不锈钢材质的管道。）

3、过滤：此工序利用立式硅藻土过滤机将酶解液进行精滤，以达到下道工序的使用要求。

所用设备和配套设施有两套单层耐压储液罐造价、立式硅藻土过滤机，车间10万级空调净化设备（公用）。

4、灌装：如果产品需使用液体状，则过滤后的液体可直接分装成标准小桶的包装。检验合格后入库保存。需使用单层耐压储液罐，包装桶烘干灭菌室。

5、浓缩、喷雾干燥：过滤后的液体在进喷雾塔前需浓缩达到一定浓度后才可以喷雾干燥，这对提高经济效益和生产效率的意义很大。此工序所用设备和配套设施有单层耐压储液罐、单效降膜式浓缩、离心式喷雾干燥塔。

第五篇：大豆

对于CBOT豆类市场来说，过去的七月确属历史罕见的“黑色七月”，仅仅一个月的时间，CBOT黄豆

8月合约价格就从800美分，下跌到600美分以下，当月跌幅达到25%。CBOT的暴跌让人触目惊心，从1064 到600美分，美盘连续合约用三个多月的时间完成了一个从天堂到地狱的旅程。但是，从7月中旬开始，DCE大豆开始抗跌与CBOT市场，特别是DCE大豆411合约，伴随着价格从2800元/吨的水平，盘跌到目前的

2650元/吨的水平，持仓量也从28万手，急剧增加到目前的39万手的水平，已经接近交易所规定的将提

高保证金的40万手的水平。特别是8月3－4日当日，大豆11月合约持仓暴增5万余手，持仓排行榜显示有

资金大鳄进驻抄底，市场多空分歧骤然加大。

大豆暴跌源于供求关系的实质性改变

全球大豆价格从今年三月底见顶并大幅回落的根本原因，在于全球大豆供求关系的根本性改变。美

国农业部7月份预计，美国2004/2005产量为8001万吨，比上的6581万吨，增加1420万吨；预计

中国2004/2005大豆产量为1750万吨，比上年增加150万吨。同时，美国农业部对主要供应2005年市

场的南美大豆产量的预测分别为：巴西为6600万吨，阿根廷为3900万吨。分别比去年的5260、3400万吨，增加1340万吨和500万吨。合计起来，2004/2005全球大豆产量将增加3410万吨，比2003/2004年

度增加18%。这一丰收预期如同一座大山，将全球大豆价格砸向熊市谷底。

当前，中美国大豆进入出花期后的结夹阶段，天气状况均属于非常适合生长的理想状况，8月2日

美国农业部发布了周度作物生长进展报告，报告显示大豆优良率为70%，上年同期为59%；大豆扬花率达

到84％，2003年同期为78％；大豆结荚率达到49％，去年为35%。同日，Meteorlogix气象机构称，美国

中西部地区持续有利于作物生长的天气条件，为这里的大豆作物度过关键的结荚阶段提供良好的外部环

境。基于此，美国著名分析公司FCStone8月3日预测今年美国大豆单产约为40.5蒲式耳/英亩，产量可达

到8116万吨，比美国农业部7月份的预期还高出115万吨。

中国方面，整个7月份东北大豆主产区天气非常适宜大豆的生长，风调雨顺，在5月份和6月初经历 的寡雨低温得到彻底的改善，6月下旬到7月上旬的充沛降雨使东北局部地区出现的旱情彻底解除，目前

大部分地区的大豆植株高度在60厘米以上，枝叶繁茂，已经全部“封垄”，全部安全度过出花期。目前

看来，8月份的天气仍旧保持正常，整体预计本的中国大豆将是一个大豆丰收年。

美国现货崩盘 基金翻空

全球大豆丰收的前景，击碎了美国豆农们对价格反弹的希望。农民们纷纷赶在价格进一步下跌之前，出售手中的库存大豆，美国现货市场随之在七月份发生历史罕见的崩盘现象。现货基差从最高时的15 0美分，大幅下跌到目前的40美分以下。同时，从2002年初开始大规模介入大豆期货市场做多的商品基

金，也开始大规模从商品期货市场中撤退，而那些一直沉淀在商品市场的基金，开始战略性翻空。

据CFTC最新公布的持仓，截止7月27日基金持有CBOT大豆净空单15004张，较6月末基金持有CBOT大 豆净多单17627张比较，已经完全转为净空。市场预计截止7月30日基金大豆净空单量已经在在1.7－1.8 万张之间。美国基金战略性翻空，不仅反映全球大豆供应量大幅增加给大豆供求格局带来的裂变，也昭

示世界性大豆需求的减弱也将成为趋势。比较明显的是，中国前期的经济调控已经波及到各行各业，下

半年经济增长速度将要下滑，全球最大的大豆需求国——中国的需求将出现阶段性的减少，而且这一减

少需要一个时间周期才能再次恢复（至少要在国内已经遭受重创的油脂行业出现复苏后）。

中国大豆价格曲高和寡

通常计算，目前美国大豆所有合约的价格都已经下跌到了600美分以下，中国大豆的价格定位也应

该在2400元/吨以下（国内外价格比一般为4：1）。但是，目前的中国大豆现货价格仍然高居3000元/吨 的位置之上，豆粕价格也位于2700元/吨左右，而大连大豆期货价格也远远高于2650元/吨以上的水平，是什么原因导致中国价格定位仍然偏高呢？

其一，大洋运费的偏高抬高了中国进口价格的定位，其中原油价格的高启是主要原因。但是，从各

种基本因素分析，原油暴涨也许是过去数年商品价格牛市运动中的最后一个泡沫了，如果没有意外，这

一泡沫也会很快破灭。其二，今年上半年，由于国际价格远高于国内市场，厂商进口积极性大大降低，再加上国家以巴西大豆含农药为理由，控制大豆进口数量，中国大豆进口量随之减少（见下表）。大豆

进口量的减少，成为支持国内豆类价格水平的主要力量。

但是，随着 CBOT大豆价格的大幅下跌，国际大豆进口成本出现大幅下降，我们以当前52.9美元/吨 的运费，38.8美分的海湾升水，美国8月大豆600美分的报价，计算出的美国大豆的进口成本为2849元/ 吨。已经低于目前大连9月大豆2918元/吨的价格，也大大低于国内进口大豆3000元/吨的分销价格。同

时，进口豆粕价格也非常低，当前有许多企业已经在寻盘南美豆粕，目前报价为2300元/吨/吨。同时，中国对南美大豆进口的限制也开始放宽，进口许可证的发放速度也加快。由此，南美大豆对华出口开始

复苏，中国询价进口美国大豆的现象也出现。预计9-10月份，中国进口量会出现恢复。

国内外大豆存货抛售压力持续存在

国际市场上，南美地区今年的大豆从收获季节就面临价格不断下跌影响，农民销售不畅，到目前仍

旧有一定数量的大豆没有销售，同时中国在进口南美大豆方面的限制更是对剩余的大豆销售影响巨大，所以国际市场大豆价格还在承受南美大豆后期急于销售的压力。同时，美国大豆现货价格继续下滑，美

国统计调查局发布的6月份大豆压榨报告利空，加上周度出口销售疲软，以及乡村运输步伐加快，均表

明美国目前大豆库存高于市场原先预期。统计调查局的报告表明美国国内压榨厂囤积的大豆库存可能足

以用到新豆上市，报告称加工厂大豆库存为7600万蒲式耳，比上年高出17％。豆粕库存比上年高出近21 ％。

国内市场上，截止2004年7月中旬，国内进口大豆库存总量290.74万吨，各港口库存约166.73万吨，近一段时间，随着国际大豆价格的暴跌，大豆后期到港成本下降，各港口分销商销售的压力逐渐加大

。同时，在8月中旬后，东北豆农在新豆即将收获的作用下，仍将出清手中存货。总体看，在新豆丰收

预期作用下，市场存货抛售压力会持续作用于8、9月份。

国内现货价格暴跌端倪已现

整个7月份，国内大豆、豆粕市场价格处于缓慢下跌的过程中，进入8月，局部地区豆粕价格开始跌

破2700元/吨/吨的支持（附：七月份豆粕价格走势图）。在美盘持续下跌，国内需求不旺的共同作用下，多数地区贸易商出现销售恐慌心理，纷纷调低大豆销售价格，意在以低价来增加销售量。但就当前情

况看，降价策略并未起到很好的效果，相反进一步加剧了市场对价格暴跌的心里预期。

种种迹象表明，国内大豆3000元/吨以上，豆粕2700元/吨以上的价格，已经属于历史高价区。在全

球大豆价格重心已经下滑到历史较低水平的现在，中国大豆、豆粕价格也将向以2500为中轴的低价区域

运动。也就是说，在美国现货市场7月份出现崩盘后，不排除中国市场在8、9月份也出现崩盘。市场的

力量是无穷的，对于过分依赖政策扶持的油脂企业来说，我们提请注意这一风险的存在。

价格底部形成需要缓慢的过程

近日来，豆粕409合约一度出现逆势上扬，部分油厂有意联手拉抬豆粕期价，以控制现货价格的下

滑态势。但是，这种违反市场经济规律的行为并不可取。油厂们对待豆粕期货的态度在过去的两三年里 发生了戏剧性的变化，从对期货的恐惧，到战战兢兢的参与，到目前的视之为工具。部分企业从思想根

源上忽略了期货是市场经济高度发达的产物，有些企业抱着“我就是老大”的思想，用资金优势和现货 优势，动辄“逼仓”。事实上，每一次逆势逼仓，对于企业来说，都是得不偿失。而如果企业用期货价

格在自然状况下的运动所揭示的方向来指导经营，远比通过逆势手段获取的利益要高得多。

翻开每一个期货价格暴跌的历史，底部的再次形成都需要一个缓慢的过程。1973年美国大豆从1288 美分的高位用半年的时间暴跌到500多美分后，也是又用了半年的时间才完成了底部的沉淀。在中、美、巴大豆供应历史性增加，全球大豆供求关系历史性逆转，美国基金大规模翻空的现在，国内豆类价格 的重新定位业已经成为必然。全球大豆价格已经完成了一个新的轮回，我们已经没有必要再留恋昨天盘

子上800美分的价格，也没有必要过早的想着明天会不会再次出现3000元/吨的奇迹，我们只需认真对待

现在，因为现在的价格仍在处于持续的震荡下跌之中。