第一章

微生物绪论常见考点

第一章 绪论

一、微生物的分类及命名

1、微生物的分类等级为界、门、纲、目、科、属、种，种是最基本的分类单位。目前国际上普遍采用的分类系统是伯杰分类系统。

2、根据微生物的大小、结构和组成不同，分为三大类型：

（1）非细胞型微生物：此类微生物无细胞结构，由一种核酸和蛋白衣壳组成，必须寄生在活细胞内才能生长繁殖。如病毒、类病毒和朊病毒（又称朊粒）。

（2）原核细胞型微生物：此类微生物由单细胞组成，细胞核分化程度低，无核膜、核仁，染色体为裸露的DNA分子，缺乏完整的细胞器。如细菌、支原体、衣原体、立克次体和螺旋体。

（3）真核细胞型微生物：此类微生物细胞核分化程度高，有核膜、核仁、完整的细胞器。如真菌、单细胞藻类。

3、每种细菌DNA中的G（鸟嘌呤）+C（胞嘧啶）含量摩尔百分比有一定范围，变化不大，DNA（G+C）mol%可以作为细菌分类的一个重要依据。

4、微生物命名由属名和种名组成，中文命名种名在前，属名在后。拉丁文则相反。

如：Mycobacterium

tuberculosis

中文名:

种名

+

属名

例:

结核分枝杆菌

二、微生物的发展

1、荷兰人列文虎克发明了显微镜，人类第一次观察到微生物。

2、法国科学家巴斯德被称为“微生物学之父”。

3、1929年，弗莱明发现了青霉素。1940年Florey和Chain将青霉素分离提纯，应用于临床。

5、德国医生郭霍证明了微生物是传染病的致病因子。

第二章

细菌的基本性状常见考点

一、细菌的形态与结构

（一）细菌的大小和形态

1、细菌个体微小，通常以微米作为测量单位。

2、细菌的基本形态有三类：球菌、杆菌、螺形菌。

（二）细菌的基本结构

1、细菌的基本结构由外向内依次是细胞壁、细胞膜、细胞质和核质。

2、根据细胞壁的化学组成与结构不同，用革兰染色将细菌分为G＋和G－两大类。

3、磷壁酸是革兰阳性菌细胞壁特有的结构，壁磷壁酸为革兰阳性菌的重要表面抗原，膜磷壁酸为黏附因子。

4、外膜层是革兰阴性菌特细胞壁的特殊成分，从外向内依次是脂多糖、脂质双层、脂蛋白。其中脂多糖是革兰阴性菌内毒素，脂质A是内毒素的主要毒性部分。

5、由于革兰阴性菌和革兰阳性菌细胞壁组成成分的不同，两者对药物的敏感性也不一样。革兰阳性菌细胞壁有五肽交联桥，是青霉素作用的部位。

6、中介体：又称中间体，是细胞膜内陷折叠而成的管状囊状结构。其功能类似真核细胞的线粒体，故有人称之为类线粒体。

7、质粒：是细菌染色体（核质）以外的遗传物质，为双链闭环DNA分子，携带遗传信息，控制细菌某些特定的遗传性状。F质粒控制性菌毛的产生、R质粒与细菌的耐药性有关。

（二）细菌的特殊结构

1、鞭毛：细菌的运动器官，是由细胞质伸出的蛋白性丝状物。

2、菌毛：主要出现在革兰阴性菌中。分为性菌毛和普通菌毛。

仅少数革兰阴性细菌具有性菌毛，较普通菌毛少，只有1～4根，比普通菌毛长且粗，呈中空管状，是两菌之间传递遗传物质的通道。带有性菌毛的细菌称为F+菌或雄性菌，无菌毛的细菌称为F-菌或雌性菌。细菌的耐药性及某些毒力因子均可通过这种方式转移。

3、荚膜：通常在机体内和营养物质丰富的环境中形成，在细胞壁外包绕的一层界限分明，且不易被洗脱的黏稠性物质。

4、芽胞：主要为革兰阳性杆菌在一定条件下细胞质、核质浓缩脱水而形成的一个遮光性很强、具有多层膜状结构、通透性很低的圆形或卵圆形小体。

▲细菌L型即为细菌细胞壁缺陷型。在人工诱导（少量青霉素、头孢菌素存在）或自然情况下，细菌L型在体内或体外均可产生。

细菌L型在含血清的高渗低琼脂培养基中能缓慢生长，可形成“油煎蛋”样菌落（典型L型细菌）：菌落较小，中心致密并深陷人琼脂中；四周较薄，由透明的颗粒组成，在低倍镜下观察菌落呈“油煎蛋”状。

细菌L型保留了亲代的遗传特性，可返祖，可致病。

二、细菌的生理

1、细菌的基本化学组成：水、无机盐、蛋白质、糖类、脂类、核酸（细菌含有RNA和DNA两种核酸）。

2、细菌有带电现象，革兰阳性菌的等电点约为pH2～3，革兰阴性菌的等电点约为pH4～5。

（一）细菌的生长繁殖、控制、遗传及变异

1、细菌根据营养类型的不同，分为自养菌（以无机物作为原料）和异养菌，异氧菌又根据所需营养物质的不同分为腐生菌（以无生命的有机物作为原料）和寄生菌（以宿主体内的有机物作为原料）。

2、细菌生长繁殖的主要条件有：

（1）充足的营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子。

（2）合适的pH：大多数细菌的最适pH为7.2～7.6，有个别例外，结核分支杆菌在pH6.4～6.8、霍乱弧菌在pH8.4～9.2的环境中生长最好。

（3）合适的温度：

35～37℃

（4）必要的气体

根据细菌对氧气 需求不一，分为：

①需氧菌：必须在有氧（空气）的情况下才能生长。

②微需氧菌：在5%～6%的低氧环境中才能生长。

③厌氧菌：必须在无氧的环境中才能生长。

④兼性厌氧菌：在有氧和无氧环境中均能生长。

3、细菌生长繁殖的规律

（1）细菌一般一无性二分裂的方式繁殖。

（2）大多数细菌20～30分钟繁殖一代，结核需要18～20小时才繁殖一代。

（3）细菌的生长曲线分为四个时期：

①迟缓期：适应阶段，此阶段细菌几乎不繁殖。一般约1～4小时。

②对数期：细菌的形态、染色性、生理活性都较典型，可以用来观察细菌的大小、形态、染色性、对抗菌药物的敏感性等。一般约8～18小时。

③稳定期：细菌繁殖数与死亡数大致平衡。

④衰亡期：细菌死亡逐渐增多，死菌数超过活菌数。

4、细菌合成代谢的产物主要有：热原质、毒素（革兰阳性菌合成外毒素、革兰阴性菌合成内毒素）、侵袭性酶类、色素、抗生素、细菌素、维生素。

▲我国规定生活饮用水的标准是：1ml水中的细菌总数不超过100cfu；100ml水中不得检出大肠埃希菌。

5、细菌的控制：

（1）消毒：杀死物体上的病原微生物但不一定杀死细菌芽胞的方法。

（2）灭菌：杀灭物体上所有的微生物，包括细菌芽孢。

（3）防腐：防止或抑制微生物生长繁殖的方法。

（4）无菌和无菌操作：无菌是指没有活的微生物存在。防止微生物进入机体或者其他操作对象的方法称为无菌操作。

（5）高压蒸汽灭菌法的压力为103.4kPa，温度为121.3℃，维持15-30分钟。检测高压蒸汽灭菌效果的细菌是嗜热枯草芽孢杆菌。

（6）用于牛奶等物品的消毒方法是巴氏消毒法。

（7）紫外线杀菌的主要机制是干扰DNA的复制。

6、正常情况下，人体与外界相同的器官都有细菌，机体的胃、骨骼、肌肉、血液、脑等无菌。滥用抗生素会导致菌群失调而发生一系列的病理反应。

7、细菌常见的变异现象：

（1）形态与结构变异：如细菌L型。①荚膜变异，从有到无；②鞭毛变异（H-O变异），从有到无；③芽胞变异，从有到无。

（2）菌落变异：S-R变异，细菌菌落光滑型与粗造型之间的变异。

（3）毒力变异：包括毒力加强和毒力减弱。

（4）抗原变异

（5）耐药性变异：细菌对某种药物从敏感变为不敏感。

（6）酶活性变异

（7）生化特性的变异

8、细菌的R质粒是耐药质粒，可通过细菌间的接合或通过噬菌体进行传递。

9、细菌基因转移与重组的方式有转化、接合、转导、溶原性转换、原生质融合等。

（1）转化：是受体菌直接摄取供体菌提供的游离DNA片段整合重组，使受体菌的性状发生变异的过程。

（2）转导：是以噬菌体为媒介，将供体菌的基因转移到受体菌内，导致受体菌基因改变的过程。

（3）接合：受体菌和供体菌直接接触，供体菌通过性菌毛将所带有的F质粒或类似遗传物质转移至受体菌的过程。

（4）溶原性转换：是噬菌体的DNA与细菌染色体重组，使宿主菌遗传结构发生改变而引起的遗传型变异。

（5）原生质体融合：两种经过处理失去细胞壁的原生质体混和可发生融合，融合后的双倍体细胞可发生细菌染色体间的重组。

10、细菌的主要遗传物质是染色体，为一条环状闭合的双螺旋DNA。质粒也是细菌的遗传物质。但不是主要遗传物质。

第三章

微生物致病性与感染常见考点

1、病原微生物能否致病与病原体的毒力、数量、侵入么户、机体的免疫力、环境因素等密切相关。

2、细菌分泌的侵袭性酶类主要有：

（1）透明质酸酶：分解结缔组织的透明质酸，易于细菌扩散。

（2）胶原酶：分解细胞外基质的胶原蛋白。

（3）神经氨酸酶：分解肠黏膜上皮细胞的细胞间质。

（4）磷脂酶：可水解细胞膜的磷脂，破坏组织细胞。

（5）卵磷脂酶：分解细胞膜的卵磷脂。

（6）激酶：将血纤维蛋白酶原激活为纤维蛋白酶，以分解纤维蛋白，防止形成血凝块。

（7）凝固酶：使血浆发生凝固，保护细菌不被吞噬细胞吞噬和杀灭。

（8）IgA蛋白酶：与细菌的黏附有关。

3、细菌毒素根据来源、性质和作用特点不同分为外毒素和内毒素。

（1）外毒素的特性：①主要是革兰阳性菌产生；②具有菌种特异性；③毒性作用强；④毒性作用有组织选择性；⑤具有良好的免疫原性：外毒素经过0.4%的甲醛处理可失去毒性但仍保持免疫原性变为类毒素，可刺激几天产生抗毒素；⑥不耐热；⑦都是蛋白质，易被酸及蛋白水解酶灭活。

（2）内毒素的特性：①主要是革兰阴性菌产生；②化学性质是脂多糖；③抵抗力强，耐热、耐酸、耐碱、耐强氧化剂；④细菌死亡溶解后释放；⑤毒性及免疫原性均较外毒素弱，不能用甲醛处理成类毒素。

4、内毒素的主要生物学活性有致热作用、白细胞增多、感染性休克、DIC等。

5、细菌全身感染在临床上常见以下几种情况：

（1）毒血症：致病菌不进入血液循环，但其产生的外毒素入血。

（2）菌血症：致病菌侵入血流，但不在其生长繁殖。

（3）败血症：致病菌侵入血流，在其中大量繁殖并产生毒性物质。

（4）脓毒血症：化脓性细菌侵入血流，并在其大量繁殖。

（5）内毒素血症：革兰阴性细菌侵入血流，并在其大量繁殖，崩解后释放大量内毒素。

第四章

细菌检验技术常见考点

一、细菌染色标本镜检

▲染色标本检查的基本程序是涂片、干燥、固定、染色、镜检。

（一）革兰染色

1、革兰染色为两种染料先后进行染色，为复染色法。

2、染液：结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、稀释苯酚复红液或沙黄。

3、染色步骤：初染1min（结晶紫）→流水冲洗→媒染1min（卢戈碘液）→流水冲洗→脱色20-30s（95%乙醇）→流水冲洗→复染0.5-1min（稀释苯酚复红液或沙黄）→流水冲洗→干燥→镜检

4、意义：鉴别细菌、指导用药、指导临床治疗。

5、结果判定：染紫色为革兰阳性，染红色为革兰阴性。

（二）抗酸染色

1、抗酸染色也是两种染料先后染色，也是复染色法。

2、染液：苯酚复红、3%盐酸酒精、吕氏碱性亚甲蓝

3、染色步骤：初染5～8min（苯酚复红加热）→流水冲洗→脱色（3%盐酸酒精）→流水冲洗→复染1min（吕氏亚甲蓝）→流水冲洗→干燥→镜检

4、注意事项：①苯酚加热冒气即可，切勿煮沸或煮干；②脱色要脱到无红色染液脱下为止。③痰标本需要经过酸或碱处理后，使痰液化后接种。

5、临床意义：一般用于分枝杆菌属的检查，如结核分枝杆菌、麻风杆菌等。

6、结果判定：染成红色为抗酸菌，染成蓝色为非抗酸菌。

二、细菌不染色标本镜检

▲压滴法、悬滴法、暗视野聚光法均用于观察细菌动力。暗视野聚光法使用暗视野显微镜可观察螺旋体及其动力。

三、细菌接种与培养技术

1、液体培养基是在肉浸液中加入1%蛋白胨和0.5%NaCl，调pH至7.4，蛋白胨的作用为提供细菌生长繁殖所需的氮源。

2、半固体培养基是在液体培养基中加入0.2%～0.5的琼脂。

3、固体培养基是在液体培养基中加入2%～3%的琼脂。

4、细菌L型的培养基必须采用高渗（3%～5%NaC

l、10%～20%蔗糖等）低琼脂培养基。

5、制备好的培养基放于4℃活冷暗处一般可以保存一周，最多不超过2周。

6、平板划线接种法一般用于含有多种细菌的标本，利用此接种法可以得到单个菌落，分为分区划线法和连续划线法。

7、分区划线法下一区应与上一区接触3～4次，此方法多用于含菌量多的标本，如粪便、浓汁、痰液等标本。连续划线法多用于含菌量少的标本。

8、斜面接种法主要用于纯种增菌及保留菌种或生化反应。

9、穿刺接种法可用于观察细菌动力，有鞭毛的细菌可沿穿刺线扩散生长。

10、液体接种法多用于普通肉汤、蛋白胨水等液体培养基接种。

11、细菌在液体培养基上的生长现象有三种，分别是：①混浊（大多数细菌）；②沉淀（链状生长的细菌，如链球菌、炭疽芽孢杆菌等）；③菌膜（专性需氧菌，如铜绿假单胞菌等）。

12、血琼脂上的溶血现象：

α溶血：又叫草绿色溶血，菌落周围血培养基变为绿色环状。

β溶血：又称完全溶血，菌落周围形成一个完全清晰透明的环。

γ溶血：即不溶血，菌落周围的培养基没有变化；红细胞没有溶解或无缺损。

双环：上层溶血环，内层为θ溶血，外层为α溶血。如产气荚膜梭菌。

13、倾注平板法用于水、牛乳、饮料及尿液等液体标本的细菌计数。

14、常用的厌氧培养法有：①疱肉培养基法；②焦性没食子酸法；③厌氧罐法；④气袋法；⑤厌氧手套箱法，⑥气体喷射法。

15、最常用的营养培养基：血平板和巧克力平板。

16、鉴别培养基：如糖发酵管、三糖铁培养基、枸橼酸盐培养基、克氏双糖铁琼脂（KIA）、伊红-美蓝琼脂和动力-吲哚-尿素（MIU）等培养基。

17、选择培养基：在培养基中加入某种化学成分或抗生素以抑制某些细菌的生长，而有助于需要的细菌生长，此培养基称为选择培养基。如SS琼脂，其中的胆盐能抑制革兰阳性菌，因而使沙门菌、志贺菌容易得到分离。

18、增菌培养基：如乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌的生长需含血液或血清的培养基；霍乱弧菌的增菌常用碱性蛋白胨水。

19、特殊培养基：包括厌氧培养基和细菌L型培养基。巯基乙醇酸钠是特殊培养基。厌氧培养基如疱肉培养基；细菌L型培养基是针对细胞壁缺陷的细菌L型，由于胞内渗透压较高，培养基必须采用高渗低琼脂培养基。

20、细菌血液培养使用的抗凝剂为聚苯乙烯磺酸钠（SPS）。

四、细菌生化鉴定技术

（一）碳水化合物代谢试验

1、碳水化合物代谢试验包括：糖（醇、苷）类发酵试验、葡萄糖氧化/发酵试验、甲基红试验（MR）、V-P试验、β-半乳糖苷酶试验（ONPG）、七叶苷水解试验。

2、甲基红试验的原理是细菌发酵葡萄糖产酸，使培养基pH下降至4.5以下，加入甲基指示剂变红为试验阳性。

3、V-P试验出现红色为阳性，ONPG出现黄色为阳性，七叶苷水解试验出现黑色为阳性。V-P试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。

4、七叶苷水解试验主要用于D族链球菌与其他链球菌的鉴别，前者为阳性（黑色）。

（二）蛋白质和氨基酸代谢试验

1、蛋白质和氨基酸代谢试验包括：靛基质（吲哚）试验、硫化氢试验、尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验、氨基酸脱羧酶试验。

2、吲哚试验是由于细菌有色氨酸酶，可以分解色氨酸而产生吲哚，与对二甲基苯甲醛反应生成红色化合物，本试验呈现红色为阳性。

3、硫化氢试验是细菌能分解含硫氨基酸，产生的H2S与Fe2+反应呈黑色为阳性。主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。

4、尿素酶试验是细菌分解尿素生成氨，使培养基呈碱性，指示剂变红为阳性。

5、苯丙氨酸脱氨酶的阳性结果为绿色，氨基酸脱羧酶的阳性结果为培养基从黄色变为紫色。

（三）碳源利用试验

1、碳源利用试验包括枸橼酸盐利用试验和丙二酸盐利用试验。

2、枸橼酸盐利用试验的阳性结果为深蓝色，阴性为绿色。

3、丙二酸盐利用试验的阳性结果为深蓝色。

4、枸橼酸盐利用试验在肠杆菌科中埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通常为阳性。

（四）酶类试验

1、触酶试验：细菌能催化过氧化氢生成水和氧气，出现气泡为阳性。

2、氧化酶试验：某些细菌具有细胞色素氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺氧化成红色的化合物，出现红色为阳性。

3、凝固酶试验：主要用于金黄色葡萄球菌的鉴定。

4、DNA酶试验：细菌产生DNA酶分解DNA，是菌落周围出现透明环。葡萄球菌、沙雷菌、变形杆菌均为阳性。

5、硝酸盐还原试验：出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应，可能是：①硝酸盐没有被还原，试验阴性；②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉（还原剂），如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴性。

（五）其他及药敏鉴定试验

1、CAMP试验：B群链球菌能产生CAMP因子，可促进葡萄球菌的β-溶血素溶解红细胞的活性，因此在两菌（B群链球菌和葡萄球菌）的交界处溶血力增加，出现箭头状或矢形（半月形）的溶血区。在链球菌中，只有B群链球菌CAMP试验阳性，故可作为特异性鉴定。

2、胆汁溶菌试验：胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。

3、O/129抑菌试验：O/129抑菌试验为药敏试验，0／129（二氨基喋啶）对弧菌属细菌有抑制作用，而对气单胞菌属细菌无抑制作用。

4、杆菌肽试验：A群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感，而其他群链球菌绝大多数对其耐药。

5、奥普托欣（Optochin）试验：几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作用。

五、细菌毒力鉴定

▲内毒素

常采用鲎试验——内毒素激活鲎试剂中凝固酶原转变为凝固酶，凝固蛋白原生成凝固蛋白。

▲外毒素

常用体内及体外毒力试验检测，也用ELISA法测定。

第五章

细菌对抗菌药物的敏感试验

一、临床常用抗菌药物

（一）β-内酰胺类

1、常见药物主要是青霉素类、头孢菌素类和单环β-内酰胺类（氨曲南和卡芦莫南）。

2、作用机制：β-内酰胺类抗生素的作用机制相似，均是与青霉素结合蛋白（PBP）结合，抑制细菌细胞壁合成，致使细菌死亡。

（二）氨基糖苷类

1、作用机制：①依靠离子的附作用，吸附在菌体表面，造成膜的损伤；②和细菌核糖体30S小亚基发生不可逆结合，抑制mRNA的转录和蛋白质的合成，造成遗传密码的错读，产生无意义的蛋白质。

2、种类：①链霉菌属：如链霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龙霉素、新霉素；

②小单胞菌属：如庆大霉素、福提霉素；

③半合成氨基苷类：阿米卡星、奈替米星、地贝卡星等，氨基苷类抗菌药物对需氧G-杆菌有较强的抗菌活性，对G+球菌有一定的活性。

（三）喹诺酮类

1、作用机制：①通过外膜孔蛋白和磷脂渗透进入细菌细胞；②作用于DNA旋转酶，干扰细菌DNA复制、修复和重组。

2、种类：①第一代：为窄谱抗菌药物，对G+球菌无作用；主要作用于大肠埃希菌，且迅速出现耐药，较少应用于临床。

②第二代：对G-和G+细菌均有作用；比较这类药的抗菌活性强度依次为环丙沙星、氧氟沙星、罗美沙星、氟罗沙星、培氟沙星、诺氟沙星；

③第三代：对G+菌作用高于第二代的4～8倍，对厌氧菌亦有作用；司帕沙星、妥舒沙星、左氧氟沙星、加替沙星、格帕沙星、莫西沙星等。

（四）大环内酯类

1、作用机制：可逆结合细菌核糖体50S大亚基的23S单位，抑制细菌蛋白质合成和肽链延伸；

2、种类：国内常用有红霉素、吉他霉素、麦迪霉素、乙酰螺旋霉素。新一代大环内酯类有克拉霉素、罗红霉素、地红霉素、氟红霉素、阿奇霉素和乙酰麦迪霉素。

（五）其他抗菌药物

▲磺胺类：竞争性第与二氢叶酸合成酶结合，阻止核酸形成。

▲四环素类：阻止酰胺基转移酶RNA与mRNA核糖体的受体位点结合。分为短效（土霉素、四环素）、中效（地美环素、美他环素）和长效（多西环素、米诺环素）。

▲氯霉素类、林克霉素类：能与细菌核蛋白体50S亚基结合，使蛋白质合成呈可逆性抑制。

▲糖肽类：属于杀菌剂，能与一个或多个肽聚糖合成中间产物形成复合物，阻断肽聚糖合成，阻止细胞壁合成。包括万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁、多粘菌素、杆菌肽等。

◆大环内酯类的抗生素是抑菌剂。

二、抗菌药物敏感试验方法

▲细菌多抗菌药物的敏感分为三种现象：敏感（S）、耐药（R）、中介（I）。

（一）扩散法（K-B法）

1、目前常用的方法，是一种半定量的方法。采用的接种方法是平板涂布法。

2、抑菌圈的大小可以反映待检菌对测定药物的敏感程度，与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

3、含药纸片贴于含菌琼脂表面时应注意：①各纸片中心距离不小于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm；②一旦碰触培养基就不可再动；③平板最好单独平放，不超过两个叠放。

4、采用标准菌株是进行质控的主要措施。

◆金黄色葡萄球菌ATCC25923，大肠埃希菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853，粪肠球菌ATCC29212或ATCC33186。

5、纸片扩散法的培养基要求其pH值为7.2～7.4，过高或过低的pH值会影响药物效能。碱性可扩大氨基糖苷类药物的抑菌圈，酸性可扩大四环素类药物的抑菌圈。

★其他高频考点

1、MBC为最低杀菌浓度。

2、体外联合药物敏感试验的FIC（部分抑菌浓度指数）：FIC指数＜0.5

协同作用；FIC指数0.5～1相加作用；FIC指数1～2

无关作用；FIC指数＞2

拮抗作用。

3、抗结核分枝杆菌的首选一线药物是异烟肼、利福平。

4、产ESBL菌株临床上用β-内酰胺类抗生素（青霉素类、头孢菌素类及氨曲南）治疗无效。

5、耐甲氧西林金葡菌(MRSA)用β-内酰胺类抗生素治疗无效。

6、产AmpC酶菌株对β-内酰胺类抗生素（青霉素类、头孢菌素类及氨曲南）及含酶抑制剂复合制剂耐药。治疗有效的药物主要有碳青霉烯类(亚胺培南)和第四代头(头孢吡肟、头孢匹罗)以及某些喹酮类和氨基糖苷类抗生素。

7、药敏试验时，采用的菌液浓度为0.5麦氏比浊度，相当于1.5×10^8/ml含菌量。

第六章

各菌属特征汇总

●葡萄球菌属

1、葡萄球均属是一类触酶试验阳性的革兰阳性（G＋）球菌，无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。包括金黄色、表皮、腐生、溶血葡萄球菌。

2、葡萄球菌触和链球菌鉴别用触酶试验，葡萄球菌触酶阳性，链球菌是阴性。

3、葡萄球菌的致病性用凝固酶试验，致病性葡萄糖球菌为阳性，还可以分解甘露醇产酸，耐热DNA酶阳性。主要见于金黄色葡萄球菌。

4、葡萄球菌的细胞壁上有葡萄球菌A蛋白（SPA），可以与人类IgG的Fc段结合，可进行协同凝集试验。

5、葡萄球菌抵抗力强，耐热、耐干燥、耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。

6、耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VRSA），耐万古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE），MRSA的首选抗生素为万古霉素。

7、表皮葡萄球菌为医院感染的重要病原菌，它是导致血培养污染的常见细菌之一。

8、腐生葡萄球菌是导致尿路感染的常见病原菌之一。

★看到凝固酶、耐热DNA酶阳性，就选金黄色葡萄糖球菌。

●链球菌属

1、链球菌属是一大群触酶试验阴性、在液体培养基上呈链状排列的革兰阳性（G＋）球菌，但在陈旧培养基或被吞噬细胞吞噬后常呈革兰阴性（G－）。无鞭毛、无芽胞。

2、肺炎链球菌矛头状排列，由于其能产生自溶酶，菌落呈脐窝状，鉴别试验：奥普托欣试验（Optochin），阳性、胆汁溶菌试验阳性、荚膜肿胀试验阳性、草绿色溶血圈。本菌是社区获得性肺炎的最常见病原菌。

3、A群链球菌用杆菌肽试验鉴别，为阳性。可产生溶血素和红疹毒素，前者在血平板上形成β-溶血环，后者引起猩红热。对人类有致病性的90%属A群。

4、B群链球菌可以水解马尿酸和CAMP试验阳性。

5、D群链球菌七叶苷试验阳性。

6、草绿色链球菌是引起亚急性心内膜炎最常见的病原菌。

7、链球菌感染引起的变态反应疾病为风湿热、肾小球肾炎，为Ⅲ。

8、化脓性链球菌产生的酶有脱氧核糖核酸酶（链道酶）、透明质酸酶（扩散因子）、链激酶（溶解纤维蛋白酶）。因为有这几种酶的的产生，化脓性链球菌感染的病灶范围广、脓液稀薄、边界不清。

9、根据溶血现象的不同，将链球菌分为甲型溶血性链球菌（α溶血）、乙型溶血性链球菌（β溶血）、丙型溶血性链球菌（γ溶血）。

●肠球菌属

1、肠球菌属是肠道的正常栖居菌。G+，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛。

2、肠球菌能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（pH9.6）、40%胆汁培养基上和10℃～45℃环境下生长；

●奈瑟菌属

1、G-，呈肾形，坦面相对，双球菌，存在于中性粒细胞内（或胞外），无鞭毛，无芽胞，有菌毛。专性需氧，氧化酶阳性。

2、在血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂，置5%～10%C02环境中，35℃培养18～24h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1～2mm的小菌落。

3、淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌用麦芽糖发酵试验区别，前者不发酵乳糖，后者发酵乳糖。

4、奈瑟菌属初次分离需要5%-10%二氧化碳。营养要求高，要用巧克力平板。

5、脑膜炎奈瑟菌定植于鼻咽部，引起流脑，少数还可引起败血症。

6、淋病奈瑟菌人类是唯一宿主。怀疑奈瑟菌感染，标本需保温保湿送检。

◆卡他布兰汉菌：氧化酶和触酶阳性，产DNA酶，大部分菌株还原硝酸盐和亚硝酸盐，营养要求不高，在普通培养基上18～20℃即可生长，借此可与奈瑟菌属相鉴别。

●肠杆菌科

1、肠杆菌科共同特征：革兰氏阴性杆菌、氧化酶阴性、触酶和硝酸盐还原试验为阳性。

2、肠杆菌中志贺、克雷伯、鼠疫耶尔菌属、EIEC没有鞭毛，也就是说它们的动力阴性。

3、O抗原和H抗原是肠杆菌科分群及分型的依据，4、乳糖发酵是区别致病性与非致病性，致病性不发酵乳糖，非致病性发酵乳糖。

●埃希菌属

1、G-，短杆菌，多数有周鞭毛，有菌毛，有荚膜或微荚膜。兼性厌氧菌。

2、大肠埃希菌在EMB平板上是带有金属光泽呈蓝紫色的菌落，麦康凯和SS琼脂上呈粉红色菌落。双糖铁发酵管（KIA）产酸产气，IMViC试验结果＋＋－－。

5、大肠埃希菌肠道外感染以尿系统感染为主，常见肾盂肾炎。

肠道内感染：（1）产毒素性（ETEC）：主要引起旅游者腹泻、婴儿腹泻。

（2）肠致病性（EPEC）：婴儿腹泻。

（3）肠侵袭性（EIEC）：类似志贺菌肠炎的症状。里急后重。

（4）肠出血性（EHEC）：常见血清型O157：H7，引起出血性肠炎，主要见于婴幼儿，还可引起溶血性尿毒症。

（5）肠粘附性（EaggEC）：婴儿急性水样腹泻。

●志贺菌属

1、G-，短小杆菌，无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛。需氧或兼性厌氧。

2、志贺菌属是细菌性痢疾最常见的病原菌，中国最常见的是福氏（B群）和宋氏（D群）。

3、志贺菌属用SS培养基或中国蓝（麦康凯）平板，菌落为红色或粉红色。

4、由于志贺菌没有鞭毛，所以它没有H抗原，有O抗原、K抗原。

5、志贺菌引起的腹泻常为里急后重。

●沙门菌属

1、G-，直杆菌，无芽胞，无荚膜，周鞭毛（除鸡沙门菌），多数有菌毛。

2、SS琼脂和麦康凯琼脂培养基：约2～4mm的透明或半透明菌落，对胆盐耐受。产H2S者在SS琼脂上形成黑色中心菌落。

3、伤寒沙门菌的抗原主要包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面（Vi）抗原。

4、伤寒沙门菌检测用肥达试验：用已知的伤寒沙门菌O、H抗原，副伤寒甲、乙H抗原稀释后与被检血清作定量凝集试验，以检测患者血清中抗体的含量，来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热症并判别沙门菌的种类。

5、菌体（O）抗原刺激机体产生的抗体以IgM为主，H抗原则以IgG为主。

6、伤寒沙门菌感染1周取血液标本，2～3周取粪便，3周以后取尿液。

7、所致疾病：肠热症，即伤寒与副伤寒病、食物中毒、慢性肠炎、败血症、沙门菌的局部感染如颈部、腰部等。

●变形杆菌属

1、G-，杆菌，多形，有周鞭毛，无芽胞、无荚膜。

2、营养要求不高，在普通培养基上呈迁徙生长。苯丙氨酸脱氨酶试验阳性使其重要的生化鉴别反应。

3、变形杆菌X19、X2、Xk等类型的O抗原与立克次体有共同抗原成分，可发生外斐反应。

●耶尔森菌属4、普通变性杆菌引起食物中毒，奇异变性杆菌引起婴幼儿肠炎

1、鼠疫耶尔森菌是鼠疫的病原菌，我国将其列为甲类传染病。

2、鼠疫耶尔森菌为G-，杆菌，球杆状，两极浓染，有荚膜，无鞭毛，无芽胞。

3、鼠疫耶尔森菌在血平板上菌落柔软、黏稠，在液体培养基中，开始为浑浊生长，24小时后为沉淀生长，48小时后形成菌膜，摇动后呈钟乳石状下沉。半固体穿刺呈纵树状生长。

4、小肠结肠耶尔森菌22～25℃培养有周鞭毛，呈翻滚螺旋运动；35℃时培养该菌无动力，最适生长温度为20～28℃。

5、小肠结肠耶尔森菌是人畜共患病原菌。

●弧菌属

1、弧菌科氧化酶都是阳性，动力阳性的G-细菌。包括弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属等。

2、霍乱弧菌根据生物学特性上的差异，分为古典生物型和Eltor生物型两个生物型，两个生物型的抗原同属O1群霍乱弧菌。

3、O1群霍乱弧菌根据菌体抗原含有A、B、C

3种抗原因子的不同，又可将其分为小川型、稻叶型和彦岛型，以小川型和稻叶型为常见流行型。

4、霍乱运动呈穿梭状或流星状，排列呈鱼群状，在亚碲酸钾培养基上是褐色菌落，培养基是碱性蛋白胨水。主要致病物质是霍乱肠毒素，患者大便呈米泔样便。

5、霍乱弧菌的鉴别培养用硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）。

6、霍乱弧菌在碱性蛋白胨水上生长迅速，最适pH为8.4～9.2。

7、霍乱弧菌的O1群、O139群引起霍乱，O2～O138群只引起人类胃肠炎，称之为非O1群霍乱弧菌。

8、霍乱弧菌的生物分型

9、霍乱弧菌采集的标本若不能及时在碱性蛋白胨水中增菌，应置于文-腊二氏保存液活卡-布运送培养基中由专人运送。

10、副溶血性弧菌是一种嗜盐菌，常存在与海水及海类产品中，是沿海地区食物中毒最常见的病原菌。

11、副溶血性弧菌与霍乱区别用蔗糖发酵试验，前者不发酵蔗糖，在TCBS上呈蓝绿色菌落，后者呈黄色菌落。

12、副溶血性弧菌能使人或兔的红细胞发生溶血，对马红细胞不溶血，称为神奈川现象。

●其他菌属主要特征及高频考点

1、肺炎克雷伯菌动力和鸟氨酸脱羧酶阴性、黏液状菌落用接种环可拉丝是主要特征。

2、小结：志贺菌IMViC（-+--），大肠埃希菌IMViC（++--），产气肠杆菌IMViC（--++）。

3、气单胞菌属运动活泼，在血平板上形成大而扁平的β溶血性菌落。嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌可发酵阿拉伯糖。

4、邻单胞菌属引起水样腹泻，与志贺菌类似，也是引起食物中毒。

5、假单胞菌属、产检杆菌属、不动杆菌属等不能发酵葡萄糖，均为非发酵革兰阴性杆菌。

6、铜绿假单胞菌为专性需氧菌，在普通培养基上菌落有生姜味，可产生水溶性的绿色素，在血平板上产生透明溶血环。该菌42℃可生长，可通过该试验区分其他假单胞菌。

7、铜绿假单胞菌可引起泌尿道、皮肤、呼吸道、烧伤创面感染等，还可以导致菌血症、败血症、心内膜炎、囊性纤维变性及婴幼儿严重腹泻等。

8、不动杆菌属有三阴特征，即氧化酶、动力、硝酸盐还原试验均为阴性。

9、流感嗜血杆菌能产生自溶酶，生长需要Ⅴ、Ⅹ因子。培养有特殊要求，营养要求高，初次分离需要5%～10%CO2，用巧克力平板。有金黄色葡萄糖球菌（可产生Ⅴ、Ⅹ因子）时候，会出现卫星生长现象。

嗜血杆菌的菌落呈露滴状。

副流感嗜血杆菌的形态、菌落与 流感嗜血杆菌相似，也能产生卫星现象，在生长过程中只需要V因子而不需要X因子。

10、军团菌属培养要求特殊，培养基中必须含有半胱氨酸和铁，培养基用活性炭-酵母浸液琼脂培养基（BCYE）。传播途径为空气。

12、布鲁菌属是人畜共患病原菌，包括羊、牛、猪、狗、绵羊布鲁菌等。引起布病。如果在做题看到有什么草原养羊、羊接触史的话，就选布鲁菌感染。

13、弯曲菌属，不分解糖类，氧化酶阳性，分离培养时，培养基中需含有大量抗生素，初次分离，须在5%O2、10%CO2、85%N2的气体环境中生长。

14、幽门螺杆菌呈海鸥状弯曲，脲酶强阳性（快速分解尿素）是特征，标本采集部位是胃，十二指肠。

15、白喉棒状杆菌特异性标志是异染颗粒，在亚碲酸钾培养基上是黑色菌落，培养基选用吕氏血清斜面和亚碲酸钾，致

19、炭疽芽孢杆菌在每毫升含有0.05～0.5U青霉素的培养基中，可发生形态变异，形成大而均匀的圆球状并相连如串珠状，称为串

抗酸染色分级报告标准：①－：连续观察300个视野未发现抗酸杆菌；②±：1～2条/300视野；③1＋：1～9抗酸杆菌条/100个视野；④2＋：1～9条抗酸杆菌/10视野；⑤3＋：1～9条抗酸杆菌/每视野；⑥4＋：≥10条抗酸杆菌/每视野。

27、麻风分枝杆菌，典型的胞内寄生，所在细胞呈泡沫状，称为麻风细胞。犰狳对本菌高度敏感，为本菌的良好动物模型。抗酸染色为阳性杆菌。

28、厌氧菌属，特征是在无氧条件下才能生长，怀疑厌氧菌感染用疱肉培养基培养。

29、破伤风梭菌，严格厌氧，有周鞭毛、无荚膜。芽胞呈正圆形，宽于菌体，位于菌体顶端，细菌呈鼓槌状。本菌的致病物质主要是外毒素，包括破伤风痉挛毒素和破伤风溶血毒素，引起强直性痉挛。

30、产气荚膜梭菌可以引起气性坏疽，在牛乳培养基中是汹涌发酵生长是其主要特征。

31、肉毒梭菌引起食物中毒，致病物质是肉毒毒素，是已知最剧烈的神经外毒素。怀疑食物中毒，从患者血清中检出毒素是最直接、有效的方法。

32、艰难梭菌可以引起腹泻和假膜性肠炎。

33、衣原体，细胞内专性寄生。有独特的发育周期：①原体有高度感染性，无繁殖能力；②始体（网状体），有繁殖能力，没有感染性。每个发育周期是40～72h。

34、沙眼衣原体培养用McCoy细胞，鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体用Hela-299细胞培养。

35、沙眼衣原体引起四种疾病：①沙眼；②包涵体结膜炎，致盲的主要因素是包涵体结膜炎；③泌尿生殖道感染，非淋菌性生殖道感染的主要病原，男性尿道炎的常见病因。④性淋巴肉芽肿：又称第四性病。

36、鹦鹉热衣原体，气溶胶传播，引起非典型肺炎（人畜共患病原体）。

37、肺炎衣原体，呼吸道传播，主要引起肺炎。

38、支原体，无细胞壁，能在人工培养基上生长，能通过细菌滤器，是最小的原核细胞型微生物，典型特征是菌落为“荷包蛋”样。治疗药物首选红霉素。

39、肺炎支原体通过呼吸道传播，引起原发性非典型肺炎。

40、解脲支原体通过性传播，引起非淋菌性尿道炎。

41、立克次体，细胞内寄生，头痛，发热，皮疹以及中枢神经是本病特征。立克次体一个重要试验是外斐试验，是非特异性凝集试验。

42、立克次体不能人工培养，检测是利用变性杆菌的公共抗原检测（共同抗原），OX19对应流行性斑疹伤寒，鼠型斑疹伤寒。OX2对应斑点热，OXK对应恙虫病。

43、钩端螺旋体通过疫水传播，是典型的人畜共患病，鼠和猪是最常见的储存宿主和传染源，是一种自然疫源性疾病。治疗药物首选青霉素。

44、梅毒螺旋体为密螺旋体，用镀银染色。

45、梅毒三期分型，一期硬下疳，二期梅毒疹，三期梅毒瘤

46、早期梅毒传染性强，破坏力小，晚期破坏力大，传染性小

47、梅毒通过性传播，输血传播，垂直传播

48、梅毒检查非特异性试验用牛心类脂质。WHO推荐用VDRL（性病研究实验室试验），RPR（快速血浆反应素试验）做筛查，确诊试验是TPPA。

49、放线菌患者病灶有硫磺颗粒，菌体呈菊花状，菌落由R型转变为S型。

50、诺卡菌属主要有星型诺卡和巴西诺卡致病，星型诺卡菌落表面无白色菌丝，巴西诺卡表面有白色菌丝，诺卡菌属抗酸染色是弱阳性，诺卡菌为革兰氏阳性杆菌，有细长的菌丝，菌丝末端不膨大。色素小颗粒压碎染色镜检，可见颗粒呈菊花状。不同种类可产生不同色素，如橙红、粉红、黄、黄绿、紫以及其他颜色。巴西诺卡菌七叶苷、黄嘌呤、肌醇、甘露醇均为阳性。星型不分解黄嘌呤。

●真菌常见考点

1、真菌检测的标本如皮屑、指甲、头发等，需要用10%KOH处理。

2、真菌培养一般选用沙氏培养基。

3、白假丝酵母菌鉴别要点：①芽管形成试验（＋）；②厚膜孢子形成试验（＋）；③脲酶试验（－）；④不能形成假菌丝；⑤革兰阳性。

4、新型隐球菌鉴别要点：①墨汁染色，在黑色背景下可见到透亮菌体和宽厚荚膜；②沙保弱培养基上可生成酵母型菌落；③脲酶试验（＋）。

5、艾滋病人最易合并感染的真菌是卡氏肺孢子菌。

6、黄曲霉菌产生的黄曲霉毒素可以致癌。

●病毒常见考点

1、病毒是非细胞型微生物，基本结构是核心、衣壳。

2、流感病毒是有包膜的RNA病毒，包膜上的血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）是重要的表面抗原，其中HA极易发生变异。此病毒的命名方式HXNX（X为型号，比如H1N1、H2N2等）。

3、麻疹病毒是单股的有包膜的RNA病毒，可以引起病毒血症，发病2天后口腔黏膜出现白色外绕红晕的黏膜斑（早期诊断有重要意义），之后患者皮肤相继出现红色版丘疹。常见并发症为肺炎。

4、腮腺炎病毒是有包膜的RNA病毒，感染后可引起一侧或双侧腮腺肿大，青春期感染者，男性易并发睾丸炎。

5、甲型肝炎病毒（HAV）是无包膜的RNA病毒。传播途径是粪-口传播，引起甲肝，还可以引起病毒血症。产生的甲肝抗体为IgM，ELISA检测用捕获法。

6、乙型肝炎病毒（HBV）是DNA病毒，引起乙肝，严重可发展为肝癌。

常见考点：①HBV的大球型颗粒（Dane）有感染性；②乙肝两对半：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc；③大三阳指HBsAg、HBeAg、抗-HBc均为阳性，此种模式为急性乙肝，传染性极强；④小三阳指HBsAg、抗-HBe、抗-HBc，此种模式感染趋向恢复期；⑤乙肝的保护性抗体指抗-HBs；⑥HBeAg阳性表示乙肝的传染性极强；⑦抗-HBs、抗-HBs、抗-HB。

16、细菌的特殊结构包括：鞭毛、菌毛、荚膜、芽胞