第一篇：暗视野光学显微镜

暗视野光学显微镜

一、操作步骤

（1）．将显微镜上的视野调节旋钮旋至暗视野处

（2）．将光源亮度调至最大，使在低倍镜下所见的光环亮度最大。

（3）先在低倍镜下找聚光镜的光亮点或环形圈，并扭动暗视野聚光镜的调节杆，使亮点或环形圈移至视野正中。

（4）．在聚光镜镜面上滴加香柏油一滴,然后稍下降。将标本置载物台上,旋上聚光器使油与载玻片接触(不能有气泡产生)。

（5）．先用低倍物镜及7×目镜进行配光对准物体。调节聚光器的高度,首先在载玻片上出现一个中间有一黑点的光圈,最后为一光亮的光点,光点愈小愈好,由此点将聚光器上下移动时均使光点增大。

（6）．换上所需目镜和高倍镜,缓慢上升物镜进行调焦,至视野中心出现发光的样品。

（7）．在盖玻片上滴一滴香柏油,将油镜镜头浸在油中后调节物镜焦距处，再缓缓上下移动聚光镜高低，使物体发出最大亮度为止。

二、注意事项

（1）．进行暗视野观察时,聚光镜与载玻片之间滴加的香柏油要充满,否则照明光线于聚光镜上面进行全面反射,达不到被检物体,从而不能得到暗视野照明。

（2）．在进行暗视野观察标本前,一定要进行聚光镜的中心调节和调焦,使焦点与被检物体一致。

（3）．由于暗视野聚光镜的数值孔径都较大(NA=1．2—1．4),焦

点较浅,因此,过厚被检物体无法调在聚光镜焦点处,一般载玻片厚度为1．0mm左右,盖玻片厚度宜在0．16mm以下,同时载玻片、盖玻片应很清洁,无油脂及划痕,否则都会严重地扰乱最终的像。

三、基本原理

生活的细菌在明视野显微镜下观察是透明的,不易看清。暗视野显微镜的原理与来自缝隙的一束强光通过暗室时,可清楚地看到其中细微灰尘的现象是一样的,即给样品照明的光不直接穿过物镜,而是由样品上反射或折射的光进入物镜,那么,在漆黑的视野中,由于反差增大了,使样品能够看得更清楚。因用暗视野法可以在黑暗的视野中看到光亮的菌体,故在观察生活细菌及细菌运动时常采用此法。

暗视野显微镜的构造主要是采用一种特殊的聚光器,在聚光器的下方中央为圆形黑盘所遮,光仅由周缘进入,使光会聚于载玻片上,并斜照物体,物体经斜射照明后,发出反射光可进入物镜,这样,造成显微镜视野黑暗,而其中的物体明亮。如无暗视野显微镜时,只需将明视野显微镜上的聚光器取下,换上暗视野聚光器即可；也可在明视野显微镜聚光器下面的滤光镜支架上放一片星形挡板(star diaphragm)构成暗视野,这种方法适用于低倍镜观察。

在暗视野中,由于有些活细胞其外表比死细胞明亮,所以暗视野也被用来区分死、活细胞,此技术现已被用于各种酵母细胞的死、活鉴别。此外,暗视野显微镜对于观察娇弱的微生物,如梅毒密螺旋体(Treponema pallidum)特别有用。

第二篇：练习使用光学显微镜教学反思

《练习使用光学显微镜》是本学期也是初中生的第一堂实验课，学生们激动、兴奋，跃跃欲试。再加上实验室比教室空旷，实验器械、水、电等较复杂所以课前组织好学生、强调好纪律是上好本节实验课的基本保障。

显微镜是进行科学探究的重要仪器，显微镜的使用是初中生学习生物学必须要熟练掌握的一项技能，是培养中学生严格规范操作的一个重要内容。再加上本节课内容较多，我认为应该用两课时完成本节课的教学。

第一课时，先上以下内容：

①认识显微镜各部分的名称；

②介绍显微镜几个重点部分的特点和作用；

③学生学习操作步骤，老师指出注意事项。

第二课时在实验上，首先复习上节课所学内容，老师演示显微镜的操作过程，然后是让学生动手操作，教师巡视指导。本节课存在的不足是教师恐怕学生不会操作，讲的太多。以后还是应该把时间多交给学生。

第三篇：实验三 植物细胞骨架的光学显微镜观察

实验三 植物细胞骨架的光学显微镜观察

一、实验目的

了解细胞骨架的结构特征及其制备技术。

二、实验器具及试剂 1．器具

普通光学显微镜、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸。2．试剂

M-缓冲液：咪唑、KCL、MGCL2、EGTA【乙二醇双醚四乙酸】、EDTA、疏基乙醇或DTT(二硫苏糖醇)；（PH6.8）磷酸缓冲液（用NaHCO3调PH值）；Triton X-100，用M-缓冲液配制；考马斯亮蓝R250,其溶剂为：甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml；戍二醛、乙醇、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶等。3.实验材料 洋葱鳞茎

三、实验内容

细胞骨架事由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可经细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构，就是细胞骨架。

（一）溶液配制（1）M-缓冲液配制：

M-缓冲液(10×原液)：咪唑34.04g，氯化镁(MgCl2•6H2O)1.02g，EGTA（乙二醇双醚四乙酸）3.8g，EDTA(乙二胺四乙酸)0.29g，巯基乙醇0.78g(0.7ml)蒸馏水加至1 000 ml。使用时，取100 ml(10×原液)加900 ml蒸馏水。（2）6mmol/L（PH6.5）磷酸缓冲液配制： 甲液：NaH2PO4•2H2O，0.938g 溶于蒸馏水中，最后稀释至1 000ml。乙液：Na2HPO4 •12H2O，2.15g加蒸馏水溶解，最后加水至1 000ml。取甲液685ml，乙液315ml加蒸馏水1000ml即成6mmol/LPH6.5的磷酸缓冲液。

（3）1%Triton X-100，用M-缓冲液配制： 取22ml Triton X-100液加M-缓冲液至200ml。（4）0.2%考马斯亮蓝R250：

考马斯亮蓝R250为0.2g，甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml（5）3%戍二醛，用磷酸缓冲液配制。

（二）实验方法与步骤

（1）撕取洋葱鳞茎内表皮（约1cm2大小若干片）置于装有PH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。

（2）吸去磷酸缓冲液，用1% Triton X-100处理20~30min。（3）吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗3次，每次10min。（4）3%戊二醛固定0.5~1h。

（5）PH6.5磷酸缓冲液洗三次，每次10min。（6）0.2%考马斯亮蓝R250染色20~30min。

（7）用蒸馏水洗1~2次，细胞置于载破片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。

（8）如观察效果好，可制作成永久切片。

在有样品的50ml烧杯中，顺序通过如下药物：50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、1/2V95%乙醇+1/2V叔丁醇、叔丁醇（每级5-10min）；或正丁醇、正丁醇、二甲苯、二甲苯（每级5-10min），然后捞取样品，平展于载玻片上，经镜检，效果好的，可加一滴中性树胶，盖上盖玻片，即成永久片。

四、实验报告

1．绘出植物细胞骨架微丝结构图。

2．分析在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征。

第四篇：实验三 细胞骨架的光学显微镜观察

实验三

细胞骨架的光学显微镜观察

一、实验目的

掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。

细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。

二、材料、试剂和仪器

1． 材料

新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞

2． 试剂

1）M缓冲液（pH 7.2）各成分终浓度为：

50mmol/L咪唑(MW:68.08)，50mmol/L KCl(MW:74.55)，0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30)，1mmol/L EGTA(MW:380.36)，0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24)，1mmol/L DTT(MW:154.3)

2）6mmol/L PBS磷酸缓冲液（pH 6.5）:

KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3(见附录3 查磷酸缓冲液的配置)

3）0.7% NaCl生理盐水

4）1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶于 M-缓冲液

5）3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL

6）0.2% 考马斯亮蓝R250染液 200mL:

考马斯亮蓝R250 0.2g，甲醇 46.5mL，冰乙酸 7mL，蒸馏水46.5 mL

3．仪器

光学显微镜，镊子，剪刀，试管，表面皿，滴管，载玻片，盖玻片,灭菌牙签，1.5mL离心管，1mL吸头，1mL取液器，酒精灯，染色缸 细胞骨架动画

三、实验程序

四、结果与分析

洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较（放大倍数10×20）

五、思考题

1．光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征？

2．对实验成功或失败的原因进行讨论。

实验中的注意事项和关键步骤

第五篇：实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察

实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察

一、实验目的：

掌握植物细胞骨架处理及染色方法。

二、实验原理：

用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。

三、实验试剂：

1、M-缓冲液；

2、pH6.8磷酸缓冲液； 3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制； 4、0.2%考马斯亮兰R250； 5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；

四、实验步骤：

1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中使其下沉(约1-2min)；

2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理30min；

3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次5min； 4、3%戊二醛固定30min；

5、pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次5min； 6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min；

7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。

五、实验结果：

在光学显微镜下，可以清晰的看到细胞骨架呈淡蓝色。

六、分析与讨论：

1、洋葱表皮细胞中，质膜下，核周，胞质中的细胞骨架的分布有无不同？ 答: 核周细胞骨架分布紧密，向外基质出延伸时明显变得稀疏，质膜下维持细胞的外部形态。因此显微镜下看到的细胞骨架形态基本与细胞形态相似。胞质中细胞骨架呈现纤维状向质膜发射，质膜处的细胞骨架围成细胞固有形态。

2、为什么试验中所看到的洋葱表皮细胞中细胞骨架有的成纤维状，有的成串球状？

答: 细胞骨架有运输细胞内物质的作用，细胞内物质沿着细胞骨架的通路进行运输，因此细胞骨架成串珠状可能是由于被运输物质停留在纤维的某一位置上使纤维状的细胞骨架成串珠状。